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恒遠(yuǎn)生物|細(xì)胞復(fù)蘇

點(diǎn)擊次數(shù):14211   發(fā)布時(shí)間:2024/3/21 10:03:20

細(xì)胞復(fù)蘇的原則
 
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。
 
一. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:
 
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
 
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
 
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。
 
二.取出凍存管:
 
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
 
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
 
三.迅速解凍:
 
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化。
 
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
 
四.平衡離心:
 
用架盤天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min 
 
五.制備細(xì)胞懸液:
 
1.吸棄上清液。
 
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
 
六.細(xì)胞計(jì)數(shù):
 
細(xì)胞濃度以5×105/ml為準(zhǔn)。
 
七.培養(yǎng)細(xì)胞:
 
將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)(或者24-48小時(shí))后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
 
特別注意初學(xué)者常犯的錯(cuò)誤:
 
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
 
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
 
3.離心忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
 
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過(guò)多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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